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ELISA試劑盒物的催化作用相結(jié)合起來
更新時間:2014-12-16   點擊次數(shù):2004次

ELISA試劑盒技術原理:以免疫學反應為基礎,將抗原、抗體的特異性反應與酶對底

1. 抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。

2. 結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性。

3. 酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。

4. 受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應。再加入酶標記 的抗原或抗體,也通過反應而結(jié)合在固相載體上。

5. 此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。

6. 加入酶反應的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量 與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關,故可根據(jù)呈色的深淺進行定 性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水 平),并且重復性好。

ELISA試劑盒樣本處理及要求:

1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。

2. 血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。

3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,ELISA試劑盒提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.

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